公司动态
公司动态
原理
氨基移换酶也称 转氨酶 。它能催化α- 氨基酸 的氨基与α-酮基的α-酮基互换，这种作用称为氨基移换作用。它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上，都起着很重要的作用。 转氨酶 的种类甚多，任何一种 氨基酸 进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化。它们的最适PH接近7.4。在各种转氨酶中，以谷氨酸-草酸乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶、GOT）及谷氨酸-丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶、GPT）活力最强。
上述两种酶均广泛存在于生物机体中。在正常人 血清 中也有少量存在。机体发生肝炎、心肌梗塞等病变时， 血清 中转氨酶活力常显著增加，在临床上转氨酶活性的测定有重要意义。测定转氨酶活性的方法很多，如分光光度法、纸上层析法及光电比色法等。
本实验利用纸上层析法，检查由谷氨酸和丙酮酸在谷丙转氨酶的作用下所生成的丙氨酸，证明组织内氨基移换作用。为了防止丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，可加碘乙酸或溴乙酸以抑制酵解作用或氧化作用。
氨基酸的纸上层析属于分配层析。以 滤纸 及其结合水作为固定相，把欲分离的混合氨基酸样品加于 滤纸 上，使流动相（展开剂）经此移动，样品中各组分就在两相溶剂问发生分配现象，在固定相中分配比例较大的氨基酸，随流动相移动的速度就慢；在流动相中分配比例较大的氨基酸，随流动相移动的速度就快。由于各种氨基酸的分配系数不同，就逐渐集中于滤纸上不同的部位，而彼此分离。层析完毕后，可用茚三酮乙醇液喷洒滤纸，使氨基酸显色形成斑点。组分的比移值（Rf）表示如下：
各种氨基酸都有其特征的Rf值，因此可根据Rf值来鉴定被分离的氨基酸。 操作方法 一、酶液的制备
将兔击晕，迅速解剖，取出肝脏，在低温条件下剪碎。用表面皿称取1.5克肝脏，放入匀浆器中，再加入 3毫升磷酸缓冲液。研成匀浆后，倒入 离心管 中，在2500转／分的条件下，离心5分钟，取上清液，即为制备的酶液。
取2支 试管 ，编号。向1号试营中加入15%三氯醋酸溶液10滴和酶液10滴，混匀，静置15分钟，做对照管。向2号 试管 中加入酶液10滴，然后向1、2号试管各备加入10%谷氨酸溶液10滴、1%丙酮酸溶液10滴、0.1%碳酸氢钾溶液10滴和0.05%碘乙酸溶液5滴，混匀，放入37℃一40℃恒温 水浴 中保温1.5—2小时。在保温过程中，将试管摇荡几次。保温完毕后取出试管，立即向第2号试管中加入15%三氯醋酸溶液10滴以沉淀蛋白质终止酶反应。将2支试管的内容物分别离心，2500转／分，5分钟。将上清液转移到试管中，用塞塞紧，放置于低温处备用。
(11)酚试剂:在大 烧杯 中,加 蒸馏 水40毫升，再加入新 蒸馏 的无色的苯酚150克。在 水浴 中加热搅拌，混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有120毫升蒸馏水的500毫升分液 漏斗 内，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7-10小时，乳状液变成两层透明的溶液，下层为被水饱和的酚溶液（即酚溶液），放出下层，贮存在棕色试剂瓶中备用。
二、器材 （1）层析缸 （2）培养皿 （3）解剖刀、剪及镊子 （4）表面化皿
（7）毛细管 （8）恒温水浴
（9）吹风机 （10）喷雾器
（11）层析滤纸 （12）针、线