链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法
2014-05-08
ABC法虽然是一种很好的方法,但是在实际应用过程中.确实也存在许多问题,如亲和 素中含有约?%的糖类,它可与组织中含糖基的物质起反应,造成背景着色。亲和素的等电 点约为10左右。可带较多的负电荷,纤维组织可带较多的正电荷,这两种电荷可互相吸引,造成背景着色。亲和素中有4个结合点,其中一半与连接抗体结合,另一半与复合物结合,如此可降低其敏感性。
为解决和克服存在的问题,20世纪90年代初提出了用链霉亲和素(streptavidin)替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,形成链霉菌抗生物素蛋白 ―过氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。链霉亲和素是从链霉菌中分离出的一种蛋白,含有四个亚基,每个亚基均具有与生物素亲和力极高的结合点。
链霉亲和素的四个亚基可以全部和二抗上的生物素结合,故又称链霉菌抗生物素蛋白,它对组织穿透性强,反应速度快。链霉亲和素的等电点为5.5~6.7,接近中性,所带的负电荷少,不容易与组织中的正电荷发生相互吸引,因而可降低背景着色。此外,链霉亲和素不含糖基,不存在与组织中含糖基类物质起反应的现象。该放大系统不含生物素,可以免除由内源性生物素所造成的背景着色,因此背景清晰,无非特异性染色,阳性反应物突出,明显易辨。从某种意义上讲,SP法比ABC法的敏感性至少高一倍以上。由于它的敏感性强,效果好,因此更受研究者欢迎。
免疫组织化学SP法原理示意图