公司动态
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聚丙烯酰胺 凝胶电泳 可用于蛋白和寡核苷酸的分离，最常用于蛋白质的分离，这里总结了DNA电泳专用的各种浓度PAGE胶配制的配方及制备方法。
聚丙烯酰胺 凝胶电泳简称为PAGE（Polyacrylamide gel electrophoresis），是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质。聚丙烯酰胺凝胶是由单体的丙烯酰胺（CH2=CHCONH2 Acrylamide）和甲叉双丙烯酰胺（CH2(NHCOHC=CH2) 2 N,N'-methylenebisacrylamide）聚合而成，这一聚合过程需要有自由基催化完成。
各种浓度PAGE胶的配制(DNA电泳用)
50ml体系：
| 丙烯酰胺 | 有效分离（bp) | 二甲苯青 | 溴酚蓝 | 丙烯酰胺30%（ml） | 10×TBE（ml) | ddH2O（ml） | TEMED（µl） | 过硫酸铵10%（µl） |
| 3.5% | 100-1000 | 460 | 100 | 5.83 | 5 | 39.17 | 25.0 | 250 |
| 5.0% | 100-500 | 260 | 65 | 8.33 | 5 | 36.67 | 25.0 | 250 |
| 8.0% | 60-400 | 160 | 45 | 13.33 | 5 | 31.67 | 25.0 | 250 |
| 12.0% | 40-200 | 70 | 20 | 20.0 | 5 | 25.00 | 25.0 | 250 |
| 15.0% | 25-150 | 60 | 15 | 25.0 | 5 | 20.00 | 25.0 | 250 |
| 20.0% | 5-100 | 45 | 12 | 33.33 | 5 | 11.67 | 25.0 | 250 |
5ml体系：
| 丙烯酰胺 | 丙烯酰胺30% （ml） |
10×TBE （ml） |
ddH2O （µl） |
TEMED （µl） |
过硫酸铵10% （µl） |
| 3.5% | 0.583 | 0.5 | 3.917 | 2.5 | 25 |
| 5.0% | 0.833 | 0.5 | 3.667 | 2.5 | 25 |
| 8.0% | 1.333 | 0.5 | 3.167 | 2.5 | 25 |
| 12.0% | 2.00 | 0.5 | 2.5 | 2.5 | 25 |
| 15.0% | 2.50 | 0.5 | 2.0 | 2.5 | 25 |
| 20.0% | 3.333 | 0.5 | 1.167 | 2.5 | 25 |
1、丙烯酰胺30%为29：1(质量比，丙烯酰胺：双甲叉丙烯酰胺)
2、TEMED 可以加到1ul/ml。
不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表
| 丙烯酰胺(%) | 有效分离范围(bp) | 溴酚兰* | 二甲苯青* |
| 3.5 | 100～2000 | 100 | 460 |
| 5.0 | 80～500 | 65 | 260 |
| 8.0 | 60～400 | 45 | 160 |
| 12.0 | 40～200 | 30 | 70 |
| 15.0 | 25～150 | 15 | 60 |
| 20.0 | 10～100 | 12 | 45 |
*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA 分子 所含碱基对数目(bp).
凝胶的制备过程：
1、 按要求装配好垂直电泳板，两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边，防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。
2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45～60℃角。
3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。
4、 加入TEMED后，立即混匀，缓缓倒入两玻璃板间的胶床中，直到液体接近溢出时为止。
5、 立即插入适当的梳子，密切注意防止梳齿下产生气泡，用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上，然后将玻璃板斜靠在物体上，使成10°角，可减少液体泄漏的机会。
6、 室温聚合一小时后，将玻璃板插入电泳槽中，上紧，倒入0.1XTBE缓冲液。
7、 小心取出梳子，加样。
大家可以根据自己试验中DNA片段大小的不同选择配制合适浓度的丙烯酰胺胶。PAGE胶配制过程中记得避免气泡的产生。