1  设备与材料

1.1 低温冰箱：-70℃

1.2 高压灭菌器。

1.3 多孔玻璃珠（或素烧瓷珠）：直径2~3mm。

1.4 商业化细胞冻存管（可选）。

2  操作步骤

2.1 将直径为2-3mm的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中（每瓶最多装30粒）制成冷冻管，高压灭菌。

2.2 标记冷冻管。

2.3 在无菌状态下打开冷冻管。

2.4 在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期，进行纯度检查后，将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液，无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。

2.5 封好冷冻管并颠倒四至五次乳化菌种培养基混悬液，切勿涡旋振荡。

2.6 菌种吸附于瓷珠上后，将多余的混悬液吸出。

2.7 也可使用商业化的细菌冻存管，此时应按照产品说明书进行操作。

3  保藏

   将冷冻管存于-70℃。

4  保藏周期

   可保存10年。

5   恢复培养

5.1 常用培养基参见附录G，在无菌条件下打开冷冻管，用无菌真或接种环取出一粒瓷珠，封好冷冻管并尽快将其送回低温条件下保存。

5.2 菌种吧哦攒瓷珠可直接接种于固体培养基或适量的液体培养基中。

6  注意事项

   注意事项包括：

   a 为使菌种长期稳定保存，在冷冻管使用过程中要注意无菌操作。

   b 在生物安全柜中进行菌种保存和复苏等操作。

   c 在处理应用过的冷冻管时应注意生物安全。