源叶生物：核酸实验中RNase污染的常见环节与防范

源叶生物 · 科研试剂技术参考（仅用于实验研究）

RNA 提取、RT-PCR、Northern 印迹等实验里，RNA 降解是结果异常的常见原因，RNase（核糖核酸酶）正是主要元凶。它无处不在、性质极稳，常规高压蒸汽灭菌难以彻底灭活，微量残留就足以让 RNA 样品降解。本文梳理核酸实验中 RNase 污染的高发环节与对应防范措施。

一、RNase 为什么难对付

RNase A 类酶几乎分布于所有环境：皮肤、唾液、灰尘、实验台面与普通自来水中都有其踪迹。它的稳定性在酶中属于突出水平——耐煮沸、耐常规高压灭菌，变性后还能复性恢复活性，对酸碱也有较强耐受。因此「容器高压灭菌过＝无酶」并不成立，必须用专门手段处理。

1. 手部与飞沫：不戴手套操作、中途揉眼抓手机、对着敞口管说话，都会把 RNase 带进体系。

2. 普通吸头与离心管：未做无酶处理的耗材，或重复使用的一次性用品。

3. 共用器皿：玻璃与塑料器皿若只做普通清洗灭菌，仍可能残留 RNase。

4. 实验用水：普通双蒸水与自来水均含 RNase，用它配缓冲液等于把污染直接带进体系。

5. 移液器：不带滤芯吸头时，气溶胶可经枪体倒灌污染样品。

- 全程佩戴手套并勤换，尤其接触门把、电脑键盘、冰箱把手之后。

- 吸头选带滤芯的无 RNase 规格，枪头盒随开随关，减少敞口时间。

- 器皿可用 0.1% DEPC 溶液浸泡处理 12 小时以上，再经高压蒸汽灭菌降解残留 DEPC（高温下分解为乙醇与二氧化碳）；注意 DEPC 会与 Tris 等含伯胺的缓冲成分反应，这类溶液应先用无酶水配制。

- 实验用水直接选用经无菌过滤与灭菌的商品化无酶水，省去自配 DEPC 水的两步操作，也避免残留 DEPC 干扰下游酶反应。

- 操作在冰上快速进行，反应管短时间敞口，减少 RNA 暴露。

问：高压灭菌为什么灭不掉 RNase？
答：RNase A 靠多对二硫键维持紧凑结构，煮沸或高压后变性，冷却后可自发复性恢复活性，因此不能单靠灭菌除酶。

问：DEPC 处理水要注意什么？
答：DEPC 具有毒性且可与胺类反应，处理后必须彻底高压灭菌降解残留；Tris、DTT 等含伯胺试剂的溶液不能直接用 DEPC 处理，应以无酶水配制。

问：商品化无酶水与自配 DEPC 水有什么区别？
答：商品化无酶水经无菌过滤与灭菌，开封即用；自配 DEPC 水需浸泡处理与灭菌两步，还要确认残留降解完全，环节更多。